"300" er basert på en storslagen tegneserieroman signert Frank Miller, og gir liv til den anerkjente romanen ved å kombinere virkelige skuespillere med digitale bakgrunner og landskaper. Filmen gjenforteller historien om slaget om Thermopylae i det gamle Hellas, der en rekke greske bystater slo seg sammen mot den fremrykkende persiske kong Xerxes og hans enorme hær. Kong Leonidas og hans 300 spartanere kjemper en heltemodig kamp mot den persiske hærens invasjon av Hellas.